张凤霞+徐瑞权
[摘要] 意图 本研讨旨在评论血管生成素2（angiopoietin-2，Ang2）与抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）相关性血管炎（ANCA-associated vasculitis，AAV）活动的联系。 办法 本研讨归入2012年5月～2016年5月间在我院住院的AAV患者共52例，一切AAV患者行伯明翰体系性血管炎活动评分（BVAS），选取BVAS<3分为非活动组，BVAS≥3分为活动组，选取我院同期健康体检者20名作为健康对照组。搜集AAV患者血清，检测Ang2、血沉（ESR）、C反應蛋白（CRP）、循环内皮细胞（CECs）等，对Ang2 水平与血清学目标进行相关性剖析。用特征性曲线（ROC）及曲线下面积（AUC）对Ang2、CRP 及 ESR 差异活动期及非活动期的精确度进行点评。 成果 活动组患者的血Ang2、ESR、CRP、CECs 及 BVAS 评分较非活动组患者显着升高，差异有统计学含义（P<0.05）。Ang2 水平与24 h 尿总蛋白（r=0.461，P<0.05）、BVAS（r=0.745，P<0.05）、CECs（r=0.657，P<0.05）别离呈正相关。ROC 剖析显现 Ang2 的曲线下面积显着高于CRP和ESR，用外周血 Ang2 的浓度来差异 AAV 患者的非活动组与活动组精确度显着高于 ESR 和 CRP（P<0.05）。 定论 Ang2 不只能够作为ANCA相关性血管炎活动性的目标，还有望成为一些内皮细胞疾病的靶向医治药物。
[关键词] 血管生成素2；抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎；活动性；循环内皮细胞
[中图分类号] R446.11 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）25-0015-04
The relationship between angiopoietin-2 and anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis activity
ZHANG Fengxia1 XU Ruiquan2
1.Department of Nephrology，the First Affiliated Hospital of Gannan Medical University，Ganzhou 341000，China；2.Department of Urology，the First Affiliated Hospital of Gannan Medical University，Ganzhou 341000， China
[Abstract] Objective To investigate the relationship between angiopoietin-2（Ang2） and anti-neutrophil cytoplasmic antibodies（ANCA） ANCA-associated vasculitis（AAV） activity. Methods A total of 52 AAV patients who were hospitalized in our hospital from May 2012 to May 2016 were enrolled in the study. All AAV patients were given Birmingham systemic vasculitis activity score（BVAS）. The patients with BVAS<3 were divided into the non-active group， and the patients with BVAS≥3 were divided into the active group. 20 healthy volunteers who received physical examination in our hospital were selected as the healthy control group. The serum of AAV patients was collected， and Ang2， ESR， C-reactive protein（CRP）， circulating endothelial cells（CECs） were detected. Correlation analysis was carried out on Ang2 level and serological parameters. The accuracy of Ang2， CRP and ESR in differentiating the active and non-active phases was evaluated by the ROC and AUC. Results The levels of Ang2， ESR， CRP， CECs and BVAS scores in the active group were significantly higher than those in the non-active group， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Ang2 level was correlated with 24 h urinary total protein（r=0.461， P<0.05）， BVAS（r=0.745，P<0.05） and CECs（r=0.657，P<0.05）. ROC analysis showed that the AUC of Ang2 was significantly higher than CRP and ESR. The accuracy of the concentration of Ang2 in peripheral blood in differentiating the active and non-active group was significantly higher than that in ESR and CRP in AAV patients（P<0.05）. Conclusion Ang2 can not only serve as an indicator of the activity of ANCA-associated vasculitis， but also is expected to be the drug of targeted therapy for some endothelial cell diseases.endprint
[Key words] Angiopoietin-2（Ang2）； ANCA-associated vasculitis（AAV）； Activity； Circulating endothelial cells（CECs）
抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）相关性体系性血管炎（ANCA-associated vasculitis，AAV）是一组累及中、小血管的抗中性粒细胞胞浆抗体阳性的本身免疫性疾病。ANCA相关性血管炎近年发病率逐年攀升，且迄今缺少前期确诊及特效医治的办法[1]。因而，探寻前期确诊目标具有重要含义。血管生成素2（angiopoietin-2，Ang2）是人体重要的血管特异性酪氨酸激酶感受器，对血管的安稳起着重要的效果。研讨标明 Ang2 可促进血管内皮细胞的凋亡[2]。本文对 Ang2 与 ANCA 相关性血管炎活动的相关性进行剖析，旨在评论Ang2在ANCA 相关性血管炎活动性点评中的含义。现报导如下。
1 材料与办法
1.1 一般材料
搜集2012年5月～2016年5月间在我院肾内科住院的AAV患者共52例。归入规范：（1）确诊为AAV，确诊规范参照1994年美国Chapel Hill会议关于体系血管炎命名分类法及美国风湿病学会的分类规范[3]。（2）兼并缓慢肾脏病：①肾危害病程超越3个月，体现为不同程度的蛋白尿、血尿，不管有无肾功用的下降；②肾小球滤过率（GFR）<60 mL/（min·1.73 m2）继续超越3个月，不管有无肾危害体现。（3）血清ANCA阳性。扫除规范：兼并严峻感染；兼并恶性肿瘤疾病；其他本身免疫性疾病（包含体系性红斑狼疮、类风湿关节炎、硬皮病、皮肌炎、混合性结缔组织病等）。其中男34例，女18例，平均年龄（61.10±13.75）岁。选用伯明翰体系性血管炎活动评分（BVAS）核算活动性评分，非活动组21例（BVAS评分<3分），活动组31例（BVAS评分≥3分）。另选取我院健康体检者20例为对照组，其中男10例，女10例，平均年龄（60.50±12.79）岁，无相关免疫性疾病。
1.2 办法
1.2.1 标本搜集 在医治之前，清晨空腹搜集外周血，注入含枸橼酸钠的抗凝管中，混匀后用离心半径为10 cm 的离心机2000 r/min 离心10 min，别离血清，取上清分装Eppendorf 管，置入-80℃冰箱冷藏。
1.2.2 相关目标的测定 选用全自动生化剖析仪测定ESR、CRP、血肌酐、血剖析、C3水平，搜集并丈量24 h 尿蛋白定量（均由赣南医学院榜首隶属医院查验科进行操作完结）。
1.2.3 Ang2的测定 运用ELISA检测血清中的Ang2，ELISA kit由R&D公司供给，操作按说明书。
1.2.4 CECs的测定 选用免疫磁珠别离办法检测[4]。具体办法：抽取外周血2 mL，用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝。洗刷M-450 磁珠（Dynal，Hamburg，Germany），将稀释后的抗CD-146 单抗（Biocytex，Marseilles，France）包被在磁珠外表，4℃孵育30 min，PBS洗刷后，用小牛血清关闭10 min，再次经PBS洗刷后，参加1 mL EDTA抗凝全血，混匀后，4℃孵育30 min，PBS洗刷后，用100 μL PBS悬浮磁珠，最终在显微镜下用细胞计数板计数，单位为（个/mL）。内皮细胞的判定规范：（1）细胞形状：较大体积的圆形或椭圆型细胞（直径10～50 μm）；（2）有必要和4个以上磁珠结合。
1.2.5 对一切样本予BVAS 点评ANCA相关性血管炎活动性最常用的办法是伯明翰血管炎活动性评分（BVAS 1994）量表法[5]，经过一般状况、皮肤黏膜、耳鼻喉、胸部、心血管、腹部、肾脏、神经体系9大体系71项条目点评血管炎的活动性。选取BVAS<3分为非活动组，BVAS≥3分为活动组。
1.3 统计学办法
选用SPSS19.0软件进行统计学剖析，计数材料选用χ2查验，计量材料用均数±规范差标明，三组间比较用方差剖析，别离将Ang2水平与BVAS相关性剖析用 Pearson 相关性剖析。用特征性曲线（ROC）及曲线下面积（AUC）对Ang2、CRP及ESR差异活动期及非活动期的精确度進行点评。P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 三组临床材料比较
活动组患者血Ang2、血沉、C反响蛋白、CECs、血沉及BVAS显着较非活动组患者显着升高，差异有统计学含义（P<0.05），其他各项根本临床特征方面比较无显著性差异（P>0.05）。见表1。
2.2 AAV患者Ang2与各项临床查验项意图相关性剖析
Ang2 水平与24 h 尿总蛋白（r=0.461，P<0.05）、BVAS（r=0.745，P<0.05）、CECs（r=0.657，P<0.05）别离呈正相关。见图1。
2.3 AAV患者在非活动组和活动组Ang2、CRP、ESR的ROC曲线剖析
Ang2差异非活动组与活动组AAV患者的曲线下面积为0.976，P<0.001，95%置信区间（0.943～1.000）；ESR差异非活动组与活动组AAV患者曲线下面积为0.698，P=0.016，95%置信区间（0.555～0.841）；CRP差异非活动组与活动组AAV患者曲线下面积为0.769，P=0.001，95%置信区间（0.628～0.910）。Ang2作ROC曲线，得出约登指数最大值为0.873，即以Ang2=574 ng/L时，其灵敏度和特异度别离为96.8%和90.5%。Ang2的曲线下面积显着高于CRP和ESR（P<0.01），提示用外周血Ang2的浓度来差异AAV患者的非活动组与活动组精确度显着高于ESR和CRP。见封三图2。endprint
3 评论
ANCA介导的中性粒细胞与内皮细胞的危害是ANCA相关性血管炎的重要发病机制[6]。ANCA激活中性粒细胞导致血管壁的粘连、浸透脆性改动及血管内皮的损坏[7]。被危害的内皮细胞失掉与周围细胞或细胞外基质的衔接，使内皮细胞与基底膜别离并开释至外周血中[8]，外周血中的循环内皮细胞（CECs）数量添加。因而，咱们能够经过核算外周血中的循环内皮细胞来衡量血管的危害[9]，并可作为点评疾病活动的量化目标。现在，点评ANCA相关性血管炎活动性最常用的办法是伯明翰血管炎活动性评分（BVAS 1994）量表法[5]。别的，临床上血沉（ESR）、C反响蛋白（CRP）也是较为常用的血管炎性活动性点评目标[10]。但上述办法均有必定的局限性，特别不能在疾病的前期精确地点评其活动度及临床效果。
本研讨检测了AAV患者外周血中活动组患者血Ang2、ESR、CRP及BVAS显着较非活动组患者显着升高，标志着Ang2与ESR、CRP、BVAS相同，可用来差异AAV患者是否活动。24 h 尿总蛋白不只是多种全身性疾病前期肾危害的灵敏目标，并且是病况演化和效果判别的重要目标。本研讨经过相关性剖析发现AAV患者血清Ang2水平与24 h尿总蛋白呈正相关，且 Ang2 水平与 BVAS、CECs 也别离呈正相关。用外周血 Ang2 的浓度来差异 AAV 患者的活动组和非活动组精确度显着高于 ESR 和 CRP，Ang2 作为临床点评ANCA 相关性血管炎活动性目标具有显着优势。
Woywodt A等[11]在2003年研讨报导了ANCA相关性血管炎患者外周血循环内皮细胞的数量，发现循环内皮细胞数目与疾病的活动性相关，在疾病活动期循环内皮细胞的数量显着增多，而停止期患者循环内皮细胞的数量削减，与本研讨的定论共同。本研讨显现，Ang2与CECs数有显着的相关性。本文不能说Ang2的浓度可直接影响到CECs数目，但许多临床试验己经证明Ang2与Tie2受体结合能够使内皮细胞失掉屏障功用，导致内皮细胞别离[12]。因而，循环Ang2与CECs有相同的价值，本文猜想循环Ang2能够削减内皮细胞的固着，导致内皮细胞别离致外周血中。Ang2的检测比CECs更便利，因而，Ang2是评价内皮细胞活动的一个既便利又精确的办法[13]。
研讨标明[14]，Ang2影响内皮细胞的安稳，使内皮细胞承受外源性影响然后促进炎症因子（腫瘤坏死因子和白细胞介素-1）和血管因子（血管内皮生长因子）活动。Ang2储存在WP小体（Weibel-Palade）中，在遭到影响后快速开释，与Ang-Tie2结合，然后促进血管的炎症反响及内皮细胞的别离。Ang2在停止的内皮细胞中表达很弱，而在活动的内皮细胞中表达很强[2]。
到现在为止，在许多试验中己经被证明Ang2能够用于某些疾病的医治[15]。Ang2在评价AAV患者的精确度上高于传统标志物CRP及ESR。Ang2 不只可能作为一种新的监测 ANCA相关性血管炎活动性的目标，还有望成为一些患者内皮细胞疾病的靶向医治药物。
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