杨毅+杨阳
[摘要] 意图 评论HSP70-1（+190G/C）基因多态性与2型糖尿病易理性联系。 办法 搜集2013年1月～2015年1月在河南省上蔡县人民医院内排泄科住院及健康体检的人群材料，按照归入与扫除规范，断定研讨目标共480例，其间2型糖尿病患者（病例组）240例，男132例，女108例；健康人群（对照组）240例，男124例，女116例。对研讨目标进行问卷查询、体格检查和实验室目标的测定，并选用PCR-RFLP技能检测HSP70-1基因+190位点多态性。 成果 2型糖尿病病例组和对照组的HSP70-1各基因型及等位基因频率差异无统计学含义（χ2=1.386，P>0.05；χ2=1.260，P>0.05）；C/C基因型携带者的体质指数显着高于G/G基因型携带者，差异有统计学含义（P<0.05）。定论 HSP70-1基因+190位点基因多态性可能与糖尿病易理性无关；C/C基因型增加了携带者患肥壮病的危险。
[关键词] 2型糖尿病；热应激蛋白70-1；+190位点；基因多态性
[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）26-0001-03
Heat stress protein 70-1 gene polymorphisms and the risk of type 2 diabetes
YANG Yi1 YANG Yang2
1.Department of Emergency， People's Hospital of Shangcai County in Henan Province， Shangcai 463800， China； 2.Department of Nosocomial Infection， the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450052， China
[Abstract] Objective To explore the association between HSP70-1 gene polymorphisms and type 2 diabetes. Methods According to the inclusion and exclusion criteria， a total of 480 population who received medical health examination and patients with type 2 diabetes in people's hospital of Shangcai from January 2013 to January 2015 were enrolled in the study. 240 patients were identified as a case group， including 108 women and 132 men， randomly selected 240 healthy people as a control group with 124 men and 116 women. Data was analyzed by physical examination， questionnaire and laboratory examination， and polymerasechain reaction-restrained fragment length polymorphism technique was used to analysed the polymorphisms of HSP70-1+190. Results There was no significant difference in the distribution of allele and genotypes frequencies of HSP70-1 between the type 2 diabetic group and control group （χ2=1.386，P>0.05； χ2=1.260， P>0.05）； CC carriers had a higher level of BMI than GG carriers in HSP70-1 gene（P<0.05）. Conclusion There is no significant correlation between HSP70-1+190 and type 2 diabetes；C/C genotype of HSP70-1（+190） is related to obesity，CC carrier had increased the susceptibility of obesity.
[Key words] Type 2 diabetes； Heat shock protein 70-1 gene； +190 site； Gene polymorphism
2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）是由多种病因引起的内排泄代谢紊乱疾病， 其特点是胰岛素相对或肯定排泄缺少及其周围安排发作胰岛素反抗，可形成蛋白质、脂肪、碳水化合物代谢紊乱，导致各种器官发作缓慢损害及功用障碍衰竭[1]。有较多数据标明[2]，糖尿病可能与遗传因子的易理性有关，糖尿病易理性与相关候选基因多态性联系已成为现在研讨的热门。热休克蛋白70（heat shock protein 70， HSP70）是指机体细胞在高温下或遭到其他有害要素影响时，适应性组成的一类结构上高度保存的多肽，它能协助康复细胞的结构与功用，并进步对应激要素的反抗力[3]。有研讨报导[4]，HSP70宗族基因多态性与一些疾病的易理性密切相关，HSP70基因多态性可能是2型糖尿病发病的重要机制之一。因而，本研讨查询并剖析HSP70宗族中HSP70-1基因多态性，评论2型糖尿病是否与HSP70-1（+190G/C）基因多态性有关，为寻觅人群易感生物标志物供给必定的思路和头绪，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 一般材料
选用病例-对照研讨办法，按照归入与扫除规范，选取2013年1月～2015年1月在河南省上蔡县人民医院内排泄科及门诊健康体检的人群材料共480例作为研讨目标。2型糖尿病患者（病例组）240例，男132例，女108例，平均年纪（56.9±7.6）岁；健康人群（对照组）240例，男124例，女116例，平均年纪（55.1±7.1）岁。
1.2 确诊规范
按照WHO1999年制定的DM新的确诊规范[5]：糖尿病症状+空腹血浆血糖（FBG）≥7.0 mmol/L或餐后2 h随机血浆血糖≥11.1 mmol/L或口服葡萄糖耐量实验中，2 h血浆葡萄糖水平（P2BG）≥11.1 mmol/L。研讨目标的原籍均为河南省，且相互之间无血缘联系，并扫除患有精神疾病、恶性肿瘤及回绝合作等查询者的人群材料。
1.3 办法
1.3.1 一般状况及生化目标检测 对查询目标进行问卷查询、体格检查和实验室目标的测定。经过问卷了解研讨目标的一般状况，如性别、年纪、民族、疾病史、宗族史等。体格检查主要是进行身高、体重、血压、腰围、臀围等目标检测，并剖析腰臀比值（WHR）和体质指数（BMI）。生化目标检测内容：搜集查询目标的血液样本，进行空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（P2BG）、糖化血红蛋白（HbA1C）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等。
1.3.2 HSP70-1基因多态性的检测 选用PCR-RFLP技能测定HSP70-1（+190G/C）基因多态性。以抽提全血中DNA为模板，进行意图基因扩增，扩增意图片段为325bp。PCR扩增反响引物序列：上游引物：5- TCCGGCGTCCGGAAGGACC-3；下流引物：5- TGCGGCCAATCAGGCGCTT-3。PCR扩增反响条件：95℃预变性5 min→95℃变性35 s→58℃退火35 s→72℃延伸45 s，上述过程共循环35次，最终72℃延伸10 min。然后取PCR扩增产品10 μL，参加限制性内切酶（BsrBⅠ）进行酶切反响，根据意图蛋白分子量用3%琼脂糖装备凝胶，在胶孔中参加8 μL酶切产品，于100 V恒压下电泳25～30 min。在凝胶成像体系下查询电泳成果，酶切反响后G/G基因型酶切片段为171、70、84 bp，C/C基因型酶切片段为241、84 bp，G/C基因型酶切片段为241、70、84、171 bp。
1.3.3 等位基因频率核算 假定G/G基因型、G/C基因型、C/C基因型个数分别为a、b、c，基因型个数为N，基因型频率分别为A、B、C。则A=a/N；B=b/N；C=c/N。G基因频率=A+2/B；C基因频率=C+2/B。
1.4 统计学剖析
Epidata 3.2软件录入数据，统计数据的剖析运用SPSS19.0软件。直接计数法核算各基因型的频率，根据遗传平衡规律的二项式公式剖析各等位基因频率；选用RxC的χ2查验剖析各组基因型及等位基因频率散布状况；多组间的比较选用单要素的方差剖析。取查验水准α=0.05。
2 成果
2.1 两组研讨目标一般状况比较
由表1可见，与对照组比较，病例组的FPG、P2BG、HbA1C、BMI、SBP、DBP、TG和LDL-C水平显着增高，而HDL-C水平显着下降，差异有统计学含义（P<0.01）。两组性别、年纪、WHR和TC水平差异无统计学含义（P>0.05）。
表1 病例组和对照组一般状况比较（x±s，n=240）
注：与对照组比较，（1）P<0.05
2.2 HSP70-1基因+190位点PCR扩增和酶切产品电泳成果
HSP70-1基因+190位点的PCR扩增后，片段长度为325 bp，见封三图1中1～6游道。HSP70-1的酶切产品进行琼脂糖凝胶电泳后可见C/C基因型为241、84 bp 2个片段（第1泳道），G/G基因型携带者为70、84、171 bp 3个片段（第2泳道），G/C基因型为241、70、84、171 bp 4个片段（第3泳道）。见封三图2。
2.3 HSP70-1基因各个基因型及等位基因频率的比较
HSP70-1基因+190位点基因型频率在病例组和对照组中散布差异无统计学含义（χ2=1.386，P>0.05）；病例组与对照组的等位基因频率散布差异无统计学含义（χ2=1.260，P>0.05）。见表2。
2.4 HSP70-1基因+190位点不同基因型间的临床材料比较
在本次查询目标中，G/G基因型的携带者为260例，G/C基因型的携带者为187例，C/C基因型的携带者为26例。由表3可见，在BMI水平上，+190位点的不同基因型间差异有统计学含义（P<0.05），而不同基因型间的其他临床目标差异无统计学含义（P>0.05）。经过组间两两比较，成果发现，与G/G基因携带者比较，C/C基因型携带者的BMI水平显着增高，差异有统计学含义（P<0.05）。
表3 HSP70-1基因+190位点不同基因型间的临床材料比较（x±s）
注：与G/G基因型比较，（1）P<0.05
3 评论
热休克蛋白又称为热应激蛋白[6]，机体细胞在高温下或遭到其他有害要素影响时，会适应性组成的一类结构上高度保存的多肽，其间最为重要、诱导发生最强的是热应激蛋白70。人类HSP70基因定坐落多条染色体上[7，8]，其间HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom一起编码分子量从66kD-78kD一类具有高度相关性的蛋白质。有学者研讨报导[9，10]，HSP70基因多态性可能在2型糖尿病及其微血管病变的发病过程中起到重要作用。现在国内研讨中，有关2型糖尿病易理性与HSP70基因多态性联系尚缺少较为完善的临床根据。因而，本研讨以内排泄科2型糖尿病患者和体检人群为查询目标，查询2型糖尿病患者与正常人群的HSP70-1基因+190位点基因多态性的散布差异，以评论HSP70-1基因+190位点基因多态性与2型糖尿病易理性联系。
有学者研讨证明[11]，HSP70-1基因-110位点和+190位点多态性均与2型糖尿病肾病相关，而其是否与2型糖尿病有关尚不清晰。本次研讨成果发现，HSP70-1（+190G/C）的各基因型和等位基因频率在2型糖尿病组与对照组中的散布差异无统计学含义，提示HSP70-1基因+190多态性可能与2型糖尿病易理性无关。经过genebank检索报导，HSP70-1基因在120、190、438和-110等位点具有多态性，以上位点是否与2糖尿病易理性有关有待进一步证明。
以往有学者研讨报导[12]，HSP70-1基因+190位点多态性可能与噪声性耳聋、高原性反响、多环芳烃类化合物等有关，考虑可能因为190位点存在G→C的骤变，引起HSP70-1肽结构的改动，使之无法完结分子伴侣的功用，然后机体不能生成或转运相应蛋白以反抗应激，故C/C基因型可能与某些疾病易理性相关[13-15]。本研讨剖析了HSP70-1（+190G/C）的不同基因型携带者间临床目标水平，成果显现，与G/G基因携带者比较，C/C基因型携带者的BMI水平显着增高，差异有统计学含义。BMI是常用的衡量肥壮的根据，其是反响全身性性肥壮的一个较好根据。本次研讨成果提示，HSP70-1基因的C/C基因型可能与全身性肥壮联系密切，其可能显着升高了携带者患肥壮病的危险。
综上所述，HSP70-1基因+190位点多态性与本次研讨人群的2型糖尿病易理性无关。但是，C/C基因型可能与肥壮相关，其增加了携带者患全身性肥壮的危险。热休克蛋白70作为一个多基因宗族，其在生物进化中可能一起存在遗传和变异，而HSP70-1、HSP70-2和HSP70-hom等基因位点多态性是否与2型糖尿病及其相关目标有关，需要很多研讨加以证明，以期为寻觅糖尿病及其相关疾病易感生物标志物供给头绪。
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（收稿日期：2015-06-04）
