1细小RNA及在胃癌中的表达
细小RNA（microRNA，miRNA）是一类长度约22个核苷酸的非编码单链小分子RNA，由具有发夹结构约70 nt的miRNA前体经过Dicer酶加工后生成。老练的miRNA在RNA诱导缄默沉静复合物的引导下，与靶mRNA 3'端非翻译区彻底或不彻底匹配结合，诱导靶mRNA降解或阻挡其翻译，然后在转录后水平缄默沉静基因的表达，并经过细胞内杂乱的调控网络对细胞发育、分解、增殖与凋亡等进程进行准确调理。miRNA基因的缺失、骤变、扩增或表观遗传缄默沉静以及生物组成进程中的反常都或许导致miRNA表达水平的改动。胃癌细胞与相应的正常胃黏膜细胞中miRNA的表达剖析显现胃癌细胞中miRNA表达状况显着反常。因而，研讨特定的miRNA在胃癌发作开展中的效果具有重要意义。
2 胃癌中miRNA与DNA甲基化润饰的彼此效果
miRNA依据靶标基因的不同可引起抑癌或许促癌效果。虽然在肿瘤中引起miRNA失调的机制还未彻底知晓，但研讨显现一些miRNA的失调与表观遗传机制如组蛋白润饰和DNA甲基化密切相关，这些调理机制能够不经DNA序列的改动就使基因表达发作可遗传的改动。DNA甲基化作为重要的表观遗传润饰现象，在肿瘤细胞中常常发作。最新研讨标明，与蛋白编码基因相同，miRNA表达相同受DNA甲基化等表观遗传影响。与此一起，miRNA也或许经过多种途径影响DNA甲基化等表观遗传调控机制。
2.1 甲基化调控miRNA在胃癌中的表达
在大都基因的5'端非翻译区和第1外显子区域常会呈现高频度的二核苷酸胞嘧啶（CpG）对，这些二核苷酸能够经过调理它们的甲基化状况来操控基因的表达。DNA甲基化将S-腺苷甲基硫胺酸（SAM）的甲基基团连接到CpG岛胞嘧啶环的五碳方位上，整个进程由DNA甲基搬运酶（DNMT）催化完结。在一些恶性肿瘤中，发动子区域的反常甲基化或许导致miRNA表达反常，近年来这方面的研讨不断添加，证明两者之间存在着杂乱的彼此调理机制。
2.1.1 超甲基化效果调控胃癌中miRNA的表达：研讨者发现在胃癌细胞中，发动子区域CpG岛的超甲基化可按捺抑癌基因的表达，包含编码p16、上皮性钙黏素、基因MLH1、CDHI和APC。相同，研讨发现miRNA编码基因发动子序列的CpG岛也可发作DNA的甲基化，这种甲基化润饰能够调控miRNA的表达。Suzuki等发现miR-34b及miR-34c在胃癌中有重要的肿瘤按捺效果，miR-34b及miR-34c在胃癌中表观缄默沉静，而且它们的表达下调与附近CpG岛的超甲基化密切相关。5-氮-2'-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）及5-氮胞苷（5-Aza-dC）均为甲基化按捺剂，嵌入5-Aza-CdR的DNA与DNMT构成安稳共价复合体，然后导致DNMT活性下降，基因组甲基化相应下降，诱导肿瘤细胞向正常细胞分解或诱导肿瘤细胞凋亡。人们常由经试剂处理前后细胞中miRNA的表达改动状况判别DNA甲基化在miRNA表达中的调理效果。Hashimoto等报导16例原发胃癌安排与相应的癌旁安排比照，其间9份胃癌安排中呈现miR-181c表达下降。在一些miR-181c阴性或低表达胃癌安排标本或胃癌细胞株中，观察到miR-181c的上游区域呈现了超甲基化信号。检测经5-Aza-CdR处理前后胃癌细胞株KATO-Ⅲ的miRNA表达改动，miR-181c在5-Aza-CdR处理后的KATO-Ⅲ细胞株和其他2个胃癌细胞株及1个结直肠癌细胞株中均呈现表达上调，而用miR-181c前体转染2个胃癌细胞株后则呈现了成长速度减慢。这些成果均标明DNA甲基化使miR-181c缄默沉静而在胃癌构成进程中发挥了重要效果。Xu等对miR-212的研讨也得出了类似成果。
2.1.2去甲基化或低甲基化效果调控miRNA的表达：基因组遍及的低甲基化是肿瘤细胞染色质不安稳和遗传缺失的原因，特异基因低甲基化会引起癌基因激活，被认为是促进搬运的重要机制之一。据报导DNA低甲基化相同也参加miRNA的调控。正常状况下，细胞中的let-7 a-3地点CpG岛高度甲基化而致其失活，在肺腺癌细胞中则呈现相应CpG岛的低甲基化。用甲基搬运酶按捺剂及组蛋白脱乙酰基酶按捺剂（HDAC）联合处理肺癌A549细胞株后呈现显着的去甲基化及let-7 a-3表达上调，激活的let-7a-3使近200个基因调理妨碍，参加肿瘤的构成。miR-196s由3个HOX簇上的平行基因座编码，归于促进肿瘤构成的miRNA之一。Tsai等发现不同细胞株中miR-196b的表达与甲基化状况密切相关，甲基化缄默沉静细胞经5-Aza-dC处理后则能使miR-196b从头激活转录，在原发胃癌细胞中能观察到miR-196b CpG岛的低甲基化状况，而胃癌中miR-196b表达显着添加，证明胃癌中DNA反常低甲基化能引起miR-196b的过度表达。可见，低甲基化或去甲基化效果也能够添加miRNA分子表达，并参加肿瘤的构成。
2.1.3 miRNA的甲基化调控的影响要素：miRNA的甲基化一起遭到其他要素的调控。研讨发现DNA甲基化缄默沉静进程经过甲基化CpG结合域（melhyl-CpG-binding domain，MBD）介导与组蛋白润饰紧密联络，DNA甲基化引起的miR-124a缄默沉静常伴随着活化组蛋白符号如乙酰化的组蛋白H3、乙酰化的组蛋白H4、三甲基的组蛋白H3-L4等的缺失，一起也伴有如甲基CpC结合蛋白2（MeCP2）、MBD2等MBD的结合。别的，这些活化的符号和结合的MBD能够经过DNA低甲基化康复和脱离，DNA低甲基化可由DNMT遗传缺失或5-Aza-CdR处理得到。一些研讨标明超甲基化miRNA经24-96 h的5-Aza-dC去甲基化处理后可从头表达，而且假如与HDAC如4-苯丁酸或制滴菌素A联合处理可进一步加强这种表达，进一步标明DNA甲基化和组蛋白润饰效果在肿瘤按捺miRNA缄默沉静中的协同人物。DNMT、去甲基化酶、组蛋白润饰酶等进行不同的组合，导致DNA甲基化状况的多样性，更为准确地调控miRNA表达，然后对细胞的各项生理病理进程发作重要意义。
2.2 胃癌中miRNA对DNA甲基化的影响
miRNA并不只受表观遗传机制调控，也能经过表观遗传润饰调控DNA甲基化和组蛋白润饰进程。最近的研讨显现DNMT、HDAC和组蛋白甲基搬运酶（HMT）都是miRNA的直接效果靶点，这些分子均触及包含DNA甲基化在内的表观遗传调理进程。
2.2.1 miRNA经过调理DNA甲基化酶调理DNA甲基化：在哺乳动物中，现已发现DNMT蛋白宗族有5个成员，分别是Dnmtl、Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b和Dnmt3L，其间只发现Dnmt1、Dnmt3a及Dnmt3b有甲基搬运酶催化活性。DNMT在肿瘤细胞中一般过度表达，被认为是肿瘤细胞呈现超甲基化现象的原因之一。一些依据标明DNMT的表达、催化活性及靶专一性都遭到基因多重调控，miRNA能够经过调理DNMT影响DNA的甲基化。Fabbri等在研讨肺癌中miRNA时发现miR-29s的表达与DNMT-3a、-3b呈负相关，而且miR-29s直接以DNMrl3a、NMT3b为效果靶点。若增强外源性miR-29s在肺癌细胞株中表达能康复DNA正常的甲基化方式，引原因甲基化缄默沉静的抑癌基因从头表达如脆性组氨酸三联体（FHIT）基因、wwOx（WW domain containing oxidoreductase）基因，并在体内和体外都能按捺肿瘤构成。Ng等在直肠癌研讨中发现miR-143将Dnmt3a作为直接效果靶点，可经过按捺其表达发挥其抑癌效果。DuurSma等的研讨也标明miRNA可结合于靶基因DNMT-3b mRNA编码区的保存靶序列，调控其表达。
2.2.2 miRNA参加保持细胞中DNA甲基化：Bao等以拟南芥植物为研讨目标探究miRNA与PHB基因甲基化之间的联络时发现，miR-165和miR-166是该植物中PHB甲基化所必需，胞质中老练的miRNA可从头进入细胞核与转录的mRNA配对并进一步结合其他因子而导致结合位点处构成非特异性染色质重构复合物，诱导基因发动子的甲基化。
2.2.3其他：miRNA除了经过以上两种方式来影响甲基化润饰，还能够经过其他途径来调控DNA甲基化。Ting等发现结肠癌细胞株HCT116中骤变的Dicer可引起一些基因发动子区域的去甲基化，而此进程中并未影响DNMT活性，提示miRNA或是其他类型的非编码RNA分子经过调理DNMT以外的途径参加了细胞DNA甲基化的调理。Wu等报导了一类新的长度为24核苷酸的miRNA，此长链miRNA经过介导靶标基因DNA的甲基化，在转录水平按捺其表达，进一步阐明晰miRNA与DNA甲基化彼此效果的多样性。
3临床相关研讨
miRNA反常表达与肿瘤发作开展之间的共同联络标明miRNA或许作为肿瘤的一个潜在医治靶点。一项研讨显现化学组成寡核苷酸antagomirs在小鼠体内可作为内源性miRNA的特异性按捺剂，在抗癌医治中或许能够用来缄默沉静致癌性miRNA如miR-17-92s。另一方面，在肿瘤细胞中有些抑癌性miRNA下调或缄默沉静，假如使这些miRNA从头激活也或许成为抗癌医治新的研讨方向。因为基因发动子区发作甲基化而去表达的基因，经去甲基化处理后能够从头表达，DNA甲基化按捺剂等表观遗传润饰疗法在抗癌医治中展示了重要的临床远景。Kim等研讨发现在胃癌细胞中miR-10b发动子的CpG处于超甲基化状况而使其缄默沉静。胃癌细胞中miR-10b的甲基化状况经5-Aza-CdR处理后显着削减，一起miR-10b表达得到极大康复。miR-10b在胃癌构成进程中发挥肿瘤按捺效果。事实上，DNA甲基化按捺剂已被美国食物药物监督管理局（FDA）同意用于选择性医治脊髓发育不良综合征。但仍有许多问题亟待解决，如使DNA甲基化反转是否会引起其他基因表达的反常等。
4结语
曩昔几年关于DNA甲基化与miRNA之间彼此调控联络的了解有了显着增加，但是在肿瘤发作开展进程中引发DNA甲基化的准确机制还有许多不知道之处。信任在不久的将来，DNA甲基化和miRNA在胃癌的前期确诊、医治、预后判别等方面会发挥更大效果，为人类霸占肿瘤这一难题拓荒更新颖更宽广的视界。
