梁淑霞等
[摘要] 意图 评论碱性成纤维细胞成长因子（basic Fibroblast Growth Factor，bFGF）对阿霉素（盐酸多柔比星）药物渗漏兔模型部分皮肤安排损害的维护效果。 办法 对成年新西兰大白兔54只打针阿霉素树立药物渗漏皮肤损害模型后，别离在30 min、24 h、72 h三个区段对损害区域施行bFGF外敷和硫酸镁外敷，并与不干涉对照，比较干涉后3 d、5 d、8 d、11 d、14 d、22 d等6个时刻点的肉眼、光镜调查的部分皮肤安排损害程度。多组间比较选用方差剖析，两两比较选用LSD-t查验。 成果 （1）肉眼调查成果：阿霉素外渗30 min干涉后bFGF组的皮损评分显着低于硫酸镁组，差异有统计学含义（P<0.05），外渗24 h干涉后，三组的皮损评分差异无统计学含义（P>0.05）；外渗72 h干涉后，bFGF组的皮损评分显着低于硫酸镁组与对照组，差异有统计学含义（P<0.05）。（2）病理调查成果：阿霉素外渗30 min干涉后，bFGF组的病理损害评分低于对照组，差异有统计学含义（P=0.049），外渗24 h及72 h干涉后，bFGF组的病理损害评分均显着低于硫酸镁组与对照组，差异有统计学含义（P<0.05）。bFGF组和硫酸镁组外渗后24 h及72 h干涉的病理损害评分差异有统计学含义（P<0.05）。 定论 bFGF对阿霉素药物渗漏损害具有维护效果，其效果强于硫酸镁湿敷医治。
[要害词] 碱性成纤维细胞成长因子；药物渗漏损害；动物模型； 愈合修正
[中图分类号] R472 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）22-0027-04
Effect of exogenous bFGF on the prevention of local skin necrosis resulting from adriamycin extravasation
LIANG Shuxia1，2 HUANG Liquan2 DING Mingxing2 CHEN Guiyuan2 ZHU Louying3
1.Department of Operation Room， Jinhua Hospital of Zhejiang University， Jinhua 321000， China； 2.Medicine College of Jinhua College of Profession & Technology in Zhejiang Province， Jinhua 321007， China； 3.Center of Laboratory Animals of Jinhua City in Zhejiang Province， Jinhua 321000， China
[Abstract] Objective To investigate the protective effects of basic fibroblast fibroblast growth factor（bFGF） on local skin tissue injury caused by adriamycin（doxorubicin hydrochloride） extravasation in rabbit model. Methods The rabbit models of driamycin extravasation were established by injecting in 54 adult male New Zealand white rabbits. Totally， 54 rabbits were divided into three groups： bFGF group， magnesium group and control group. The three groups were respectively given bFGF， magnesium sulfate， and the non-intervention topilally at three segments 30 min， 24 h， 72 h after the successful establishment of the models. The degrees of local skin tissue damage after the intervention was evaluated by naked eye and light microscope at 6 time points（3 d， 5 d， 8 d， 11 d， 14 d， 22 d） were recorded and compared. Analysis of variance and LSD-t test were used for statistics. Results （1）Visual observation results： The lesion scores in the bFGF group were significantly lower than that in the magnesium group 30 min after driamycin extravasation（P<0.05）. The lesion scores between the three groups were not statistically significant 24 h after driamycin extravasation（P>0.05）. The lesion scores in the bFGF group were significantly lower than that in the magnesium group and the control group 72 h after driamycin extravasation（P<0.05）. （2） Pathological observations results： The pathological lesion scores in the bFGF group were lower than that in the control group 30 min after driamycin extravasation（P=0.049）. The pathological lesion scores in the bFGF group were significantly lower than that in the magnesium sulfate group and the control group 24 h and 72 h after driamycin extravasation（P<0.05）. The pathological lesion scores between 24 h and 72 h after driamycin extravasation were significant differences in the bFGF group and magnesium group （P<0.05）. Conclusion The bFGF has protective effects on the skin injury caused by adriamycin extravasation， and its therapeutic effect is better than magnesium sulfate.
[Key words] Basic fibroblast growthfactor（bFGF）； Chemotherapeutic extravasation injury； Animal model； Wound healing
化疗药物外渗引起的部分皮肤和安排损害是较常见的副反响，临床表现为部分安排的炎症、溃疡，乃至坏死[1，2]。其间尤以蒽环类抗肿瘤药物及植物碱类抗肿瘤药物外渗构成的后果严峻，如阿霉素等以静脉给药为主，外渗后临床多选用冷敷、关闭等处理，效果欠佳，无公认有用办法[2，3]。而新近碱性成纤维细胞成长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）已用于医治伤口和溃疡，能促进伤口的无瘢痕康复[4，5]，但罕见在化疗药物外渗损害中运用。本研讨经过仿制阿霉素渗漏新西兰兔部分皮肤和安排损害模型，调查bFCF关于部分皮肤安排损害的维护效果。现报导如下。
1 材料与办法
1.1 试验材料
健康新西兰同种家兔54只，体重2.5～3.0 kg，男女参半，由金华市试验动物中心供给，许可证号SYXK（浙）2010-0151。阿霉素（盐酸多柔比星，浙江海正药业股份有限公司，批号 120307），bFGF（贝复济，重组牛碱性成纤维细胞成长因子，珠海亿胜生物制药有限公司，6300IU，批号20130803）。硫酸镁粉（南昌白云制药有限公司，500 g/袋，批号20130701）。LeicaDM2000光学显微镜产自德国Leica公司；UCMOS9000KPA显微镜CCD成像体系产自杭州图谱光电科技有限公司。
1.2 建模办法
取兔双背双臀作为试验区域。试验前24小时用脱毛剂将家兔背部毛脱尽，制成一块8 cm×8 cm的无毛区，家兔双臀部脱毛备直径约8 cm的皮肤；背部避免的脊柱为中心，划分为左背部与右背部，臀部平分为左右两区，别离在各区域皮下打针阿霉素1 mL（0.8 mg/kg，约1.0 mg/mL，）制成皮丘约1 cm2的化疗药物渗漏损害模型，每只制成5个区域挑选3个典型区域进行干涉并点评。模型点评办法：参照柳英等[6]办法评判成功树立化疗药物渗漏损害模型，即各区域打针精确剂量后，部分皮肤拱起成皮丘，直径约为2.0～2.5 cm。
1.3 干涉与分组
54只新西兰同种家兔根据初次给药时刻的不同分为化疗药物外渗后30 min、24 h和72 h组，每组18只。各组又依照干涉办法不同分为bFGF外敷组、硫酸镁外敷组及不干涉对照组，每组18只。在上述3个时刻点，别离用含bFGF药液和50%硫酸镁溶液的1.5 cm×1.5 cm 无菌湿纱布两层（运用时用无菌蒸馏水稀释）覆盖于外渗部分，相同敷部规模超出渗漏区域0.5 cm，每日3次（bFGF总用量为200 IU/cm2），每次约15 min（一旦纱布变干立刻替换），接连7 d。每组别离于各自初次干涉后的第3 d、5 d、8 d、11 d、14 d、22 d共6个时刻点，在腹腔麻醉下提取活体标本。
1.4 目标调查与办法
肉眼调查：各组外渗性损害程度、面积及外渗性损害愈合时刻。皮肤损害评分参照杨翠芹等[7]的办法，结合本试验特色，赋分为：皮肤正常为0分；红肿直径≤3 cm为1分；>3 cm为2分；溃疡直径≤1 cm为3分；>1 cm为4分。
安排病理形态学光镜调查：标本选材后用4%多聚甲醛固定3 d，制成白腊包埋切片，接连切片行HE染色，在光镜下调查表皮是否无缺、有无溃疡构成、坏死及炎细胞、成纤维细胞、重生血管等肉芽安排的增生状况。病理损害点评参照郭鹏等[8]的办法：轻度损害：弥散性炎性细胞滋润、表皮无缺；中度损害：安排水肿、散在出血、显着炎性细胞滋润；重度损害：溃疡、安排坏死、出血。结合实际参加超重度损害：安排结构彻底消失，广泛坏死。计分办法为：轻度1分，中度2分，重度3分，超重度4分。
1.5 统计学办法
选用SPSS17.0统计学软件进行剖析，计量材料以（x±s）表明，多组间比较选用重复丈量方差剖析，两两比较选用LSD查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 阿霉素不同处理组部分安排损害程度肉眼调查比较
新西兰同种家兔在阿霉素打针后部分均呈现边界不清的红肿、红斑色彩渐加深。1周内呈现皮肤溃烂、溃疡，2周后渐愈合、结痂、瘢痕构成。在建模成功后30 min、24 h、72 h三个区段对损害区域施行bFGF与硫酸镁外敷干涉14 d后，肉眼调查显现两组皮损的愈合状况均较对照组杰出，且bFGF组的愈合效果优于硫酸镁组，尤其在72 h干涉更显着（封三图1）。
各组皮肤肉眼损害评分比较见表1，在阿霉素外渗后30 min 和72 h干涉后不同处理组的肉眼损害评分差异有统计学含义（P<0.01）；LSD组间比较显现，外渗后30 min干涉后bFGF组的皮损评分显着低于硫酸镁组，差异有统计学含义（P=0.00<0.05），外渗后24 h干涉后bFGF组与硫酸镁组及对照组的皮损评分比较差异均无统计学含义（P=0.35、0.19，P>0.05）；外渗后72 h干涉后bFGF组的皮损评分显着低于硫酸镁组与对照组，差异有统计学含义（P=0.00、0.01，P<0.05）。而外渗后30 min干涉后硫酸镁组的皮损评分高于对照组，差异有统计学含义（P=0.00，P<0.05）。外渗后24 h和72 h干涉后硫酸镁组与对照组的皮损评分差异无统计学含义（P=0.69、0.63，P>0.05）。一起，各组外渗后30 min、24 h及72 h干涉的皮损评分差异均无统计学含义（P>0.05）；LSD组间比较显现，仅硫酸镁组外渗后30 min与24 h干涉的皮损评分差异有统计学含义（P=0.047），见表1。
表1 阿霉素不同处理组部分安排损害程度肉眼调查比较（x±s，分）
注：与硫酸镁组比较，*P<0.05；与对照组比较，▲P<0.05
2.2 阿霉素所构成的皮损在纷歧起刻干涉的病理调查比较
阿霉素打针后兔部分损害3 d，光镜下均见表皮部分掉落，构成溃疡，深及肌肉安排，炎细胞滋润，部分坏死。阿霉素30 min、24 h、72 h干涉后皮肤安排损害达顶峰时刻别离为8 d、5 d、3 d；30 min、24 h、72 h三个区段对损害区域施行bFGF与硫酸镁外敷干涉14 d后，72 h干涉时bFGF组在14 d炎症减轻，根本康复正常，而硫酸镁组炎症尚显着；72 h干涉时，bFGF组在22 d时炎症细胞滋润显着减轻，呈轻度损害，而硫酸镁组炎症尚显着（封三图2）。
各组皮肤病理损害评分比较见表2，在阿霉素外渗后24 h和72 h两个时刻点干涉后不同处理组的病理损害评分差异均有统计学含义（P均<0.01）；LSD组间比较显现，外渗后30 min干涉后bFGF组的病理损害评分低于对照组，差异有统计学含义（P=0.049），外渗后24 h干涉后bFGF组的病理损害评分显着低于硫酸镁组与对照组，差异有统计学含义（P=0.00、0.00，P<0.05）；外渗后72 h干涉后bFGF组的病理损害评分显着低于硫酸镁组与对照组，差异有统计学含义（P=0.00、0.00，P<0.05）。而外渗后三个时刻点干涉后硫酸镁组与对照组的病理损害评分差异则无统计学含义（P=0.32、0.06、0.51，P>0.05）。一起，bFGF组和硫酸镁组外渗后24 h及72 h干涉的病理损害评分差异均有统计学含义（P<0.05）；LSD组间两两比较显现，别离与30 min干涉比较，bFGF组外渗后24 h、72 h干涉的病理损害评分的差异均有统计学含义（P=0.00、0.00，P<0.05），而硫酸组仅外渗后30 min与72 h干涉间的病理损害评分差异有统计学含义（P=0.01，P<0.05），见表2。
表2 阿霉素所构成的皮损在纷歧起刻干涉病理成果比较（x±s，分）
注：与硫酸镁组比较，*P<0.05；与对照组比较，▲P<0.05；与同组外渗后30 min干涉比较，#P<0.05
3 评论
本研讨成果显现，bFGF外敷对阿霉素外渗致部分皮肤安排损害具有维护效果，尤以化疗药物外渗后前期干涉（30 min、24 h）效果优于硫酸镁外敷，显着强于未干涉对照组。一起，bFGF及硫酸镁外敷对阿霉素外渗后推迟处理时（外渗后72 h干涉时）呈现的皮肤安排损害的维护效果均显着，提示bFGF加快修正的进程，缩短治好时刻。
阿霉素是抗有丝分裂的细胞毒性药物，能成功地诱导多种恶性肿瘤的缓解而广泛用于临床，以静脉给药为首要途径，一旦药物渗漏出血管外，引起安排损害与氢氧自由基的构成有关，经过损害细胞膜脂质和DNA，发作部分安排坏死，溃疡可深及肌腱和关节，构成功用损失[3]。国内化疗药物外渗引起损害的发作率为0.1%～6.0%，国外达5.0%[9，10]，特别是长时间多阶段化疗，患者静脉损害严峻，静脉穿刺困难，更易发作渗漏，不光添加患者的苦楚、加剧经济负担与思维压力，若不及时、彻底地处理，有可能导致皮肤癌的发作[11]。现在关于化疗药物渗漏的防护对策方面，防备最为要害，其行动包含进步医护人员的防护认识及操作技能，正确挑选静脉通道、恪守操作规程、标准输液办法及加强患者的健康宣教等[12]；而发作后处理首要选用部分关闭法、热敷或冰敷、各种药物软膏（包含中药外敷）外涂、打针特异性解毒剂等医治办法[13，14]。而咱们选用的bFGF为临床常用的成长因子之一，能激活内源性成长因子活性或上调成长因子受体表达，经过对ERK/Akt信号的磷酸化进程而加快成纤维细胞增殖和DNA组成，并进步TGF-β的排泄， 进而协同其他成长因子如VEGF对肌成纤维细胞构成发挥效果， 然后显着促进修正效果[15]。国外在皮肤安排工程伤口愈合中运用bFGF显现其快速愈合和削减换药等临床优势[16]，而 bFGF已在国内临床软骨工程方面广泛运用，并在牙洁治术中发现其能促进伤口牙龈安排成长和创面愈合[17]，均支撑本研讨定论。
本研讨还发现，bFGF外敷对阿霉素外渗致部分皮肤安排损害前期干涉的维护效果最佳，剖析原因可能是伤口前期部分受创安排中内源性bFGF的含量处于缺少状况，到伤口后第2～4周其血清水平到达排泄顶峰[18，19]，需用外源性的bFGF促进并影响安排排泄bFGF，然后到达医治效果。咱们的成果提示，临床药物外渗前期运用bFGF能够防备溃疡发作，如能在30 min内干涉，效果最理想，可将皮肤不良反响降至最低极限，以进步患者的生计质量，削减医疗纠纷。但本试验研讨中效果点评选用肉眼损害评分与病理评分成果略有纷歧，即肉眼损害评分仅外渗后72 h干涉后bFGF组的皮损评分显着低于对照组，效果显着，而病理评分显现外渗后24 h干涉及72 h干涉后bFGF组的病理评分均低于对照组，效果均显着，阐明肉眼损害评分阳性率低，而病理评分更精确，证明bFGF能抗炎、促进肉芽安排构成及修正愈合[20，21]。一起，本研讨成功树立外渗后损害的兔动物模型，制造简洁，能充沛模仿人类化疗药物外渗导致的皮肤安排损害，具有可行性和可重复性，尤其在外渗后皮肤损害的推迟反响研讨中可能比相应的大鼠模型更具优势。
综上所述，bFGF外敷对阿霉素药物渗漏损害具有维护效果，其效果强于硫酸镁湿敷医治，其制造简洁，值得临床推行。本动物试验的成功为临床医治化疗药物渗漏损害供给有力的试验根据，其效果机制及防控有待进一步研讨。
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（收稿日期：2015-05-19）
