冯海利+侯亮
[摘要] 意图 经过免疫安排化学SP法检测子宫内膜癌细胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表达状况，寻觅子宫内膜癌新的有用的检测分子，为子宫内膜癌的前期发现和确诊、监测复发和搬运、判别效果和预后供给目标。 办法 选取2011年2月～2013年9月来我院承受手术医治的子宫内膜癌患者80例，一起选取52例正常子宫内膜安排和39例子宫内膜不典型增生安排。 成果 Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在三种安排中阳性表达差异明显（P<0.05）。Smac与Bcl-2、Survivin在子宫内膜癌安排中阳性表达均呈负相关（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而与Bax呈正相关（rBax=0.458，P<0.05）；而Bcl-2与Survivin阳性表达呈正相关（rSurvivin=0.581，P<0.05），而与Bax呈负相关（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax与Survivin阳性表达呈负相关（r=-0.511，P<0.05）。 定论 对疑似子宫内膜癌患者进行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表达的检测以进行进一步确诊，进步临床确诊率，为往后的临床医治计划供给新的医治靶点和思路。
[关键词] 子宫内膜癌； 第二线粒体源性激活半胱天冬酶； B淋巴细胞瘤-2基因； 凋亡按捺基因； 促凋亡因子
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）23-0001-03
[Abstract] Objective To explore the expression of Smac， Bcl-2， Survivin in endometrial cancer cells by immunohistochemical SP method in patients with endometrial cancer， and to provide new indicators for early detection and diagnosis， monitoring of recurrence and metastasis， and determination of efficacy and prognosis of endometrial cancer. Methods 80 patients with endometrial cancer surgically treated in our hospital from February 2011 to September 2013 were selected， and another 52 cases of normal endometrial tissue， and 39 cases of atypical endometrial hyperplasia were also selected. Results There were significant differences in expression of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax in these three kinds of tissues（P<0.05）. The positive expression of Smac had a negative relation with Bcl-2 and Survivin in endometrial cancer tissue（rBcl-2= -0.398， rSurvivin=-0.335， P<0.05）， and had a positive relation with Bax （rBax=0.458， P<0.05）. The positive expression of Bcl-2 had a positive relation with Survivin （rSurvivin=0.581， P<0.05）， and had a negative relation with Bax（rBax=-0.477， P<0.05）. The positive expression of Bax had a negative relation with Survivin（r=-0.511， P<0.05）. Conclusion Detection of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax expression in patients suspected with endometrial cancer can further conform the diagnosis， improve the rate of definite diagnosis， and provide new treatment target and approach for future therapy.
[Key words] Endometrial cancer； Smac； Bcl-2； Survivin； Bax
近年来，子宫内膜癌的发病率和死亡率均呈上升趋势，且有年轻化的趋向。在我国，子宫内膜癌的发病率仅次于宫颈癌，在妇科恶性肿瘤中居第2位[1-3]。近年来研讨发现[4-6]，子宫内膜癌的发作、开展可能与肿瘤细胞的凋亡受阻联系密切，第二线粒体源性激活半胱天冬酶（Second Mitochondria-derived Activator of Caspases，Smac）、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、凋亡按捺基因（Survivin）和促凋亡因子（Bax）可能经过不同机制参加了肿瘤细胞的凋亡进程。因而，本文旨在经过对子宫内膜癌患者手术后切除标本行免疫安排化学SP法检测以断定子宫内膜癌肿瘤细胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表达的临床价值，进一步剖析它们之间的相互联系及其与临床病理目标之间的联系，以寻觅子宫内膜癌新的有用的检测分子，为子宫内膜癌的前期发现和确诊、监测复发和搬运、判别效果和预后供给目标。
1 材料与办法
1.1一般材料
选取2011年2月～2013年9月来我院承受手术医治的子宫内膜癌患者80例，年纪29～68岁，均匀（52.5±10.2）岁，病程（1.3±0.2）年；一起选取52例承受病理活检的健康人正常子宫内膜安排，年纪27～69岁，均匀（53.8±11.0）岁；另选取39例因为不正常阴道出血而入院的子宫内膜不典型增生安排，年纪27～72岁，均匀（52.7±10.9）岁，病程（1.2±0.3）年。一切当选研讨目标根据为活体病理查看承认后进行分组，扫除其他体系严重疾病者及相似病症者、精神疾病者。三组当选研讨目标在年纪、病程及相应基线材料方面差异无统计学含义（P>0.05）。
1.2办法
选用SP免疫组化染色，整个进程按试剂盒阐明进行操作。现用现配3%通明质酸（Hyaluronan，HA），密封20 min，蒸馏水洗2次，每次5 min；再用磷酸缓冲盐溶液（Phosphate Buffer Saline，PBS）洗刷2次，持续5 min；山羊血清密封1 h；取出切片，持续用PBS缓冲液进行3次洗刷，共16 min；滴加即用型方便免疫组化即用型方便免疫组化（MaxVision）试剂，规范：18 mL（360片），湿盒中室温静置15 min；PBS洗刷3次，每次5 min；将其置于DAB中保持2～8 min，实时镜下调查。将白腊消融后并除掉杂质，并在白腊中以1∶1参加邻二甲苯制成软蜡A和软蜡B，一起制备硬蜡A和硬蜡B（含有软蜡B），通明好的安排分别在软蜡A和软蜡B中浸泡30～40 min，在硬蜡A和硬蜡B中浸泡30 min。对待测样品用白腊包埋，将样品与白腊结合待凝结后使用白腊切片机将待测安排切成4 μm厚度芯片，将安排芯片置于65℃恒温中5 h待测。
1.3调查目标
选用免疫安排化学技能（SP法）检测80例子宫内膜癌安排、39例子宫内膜不典型增生安排和52例正常子宫内膜安排中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表达状况。Smac、Bcl-2、Survivin和Bax的阳性染色规范鉴定选用半定量法。
1.4统计学办法
选用SPSS 21.0统计学软件进行统计剖析，其间相关性剖析选用Spearman相关剖析，计数材料选用χ2查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在不同安排中的阳性表达
经统计学剖析可知，Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在不同安排中的阳性表达差异明显（P<0.05）。其间Smac和Bax在正常子宫安排中阳性表达率最高，Bcl-2以及Survivin在子宫内膜癌安排中阳性表达率最高。
2.2 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在子宫内膜癌安排中阳性表达的关联性剖析
经统计学剖析可知，Smac与Bcl-2、Survivin在子宫内膜癌安排中阳性表达均呈负相关（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而与Bax呈正相关（rBax=0.458，P<0.05）；而Bcl-2与Survivin在子宫内膜癌安排中阳性表达呈正相关（rSurvivin=0.581，P<0.05），而与Bax呈负相关（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax与Survivin在子宫内膜癌安排中阳性表达呈负相关（r=-0.511，P<0.05）。
3 评论
近年来研讨发现[7-16]，子宫内膜癌的发作、开展可能与肿瘤细胞的凋亡受阻联系密切，跟着分子生物学的不断开展，从细胞凋亡的视点深入探讨子宫内膜癌的发作开展已备受人们的重视。其间Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax可能经过不同的机制参加了肿瘤细胞的凋亡进程。
Smac是存在于线粒体内的可以调理细胞凋亡的一类蛋白质，本文中Smac在子宫内膜癌安排中阳性表达率低于子宫内膜不典型增生安排中的阳性表达，阐明Smac在肿瘤安排中表达较低，可能是因为其他相关因子对Smac发生的拮抗效果，然后按捺Smac发生并发挥效果，导致肿瘤细胞无法正常凋亡完成无限增殖，Bax与Smac呈正相关，阐明二者归于同一类因子。Smac高表达可以使让肿瘤细胞更灵敏地承受凋亡影响，促进肿瘤细胞的凋亡，进步肿瘤细胞对化疗药物的灵敏程度，而Smac的低表达则有可能阻挠肿瘤细胞的凋亡。Smac经过反转凋亡按捺蛋白（IAPs），特别是X连锁凋亡按捺蛋白（XIAP）而完成促进凋亡，其与IAPs结合，使其丢掉可以按捺半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的才能，然后促进凋亡。许多要素诱导肿瘤细胞凋亡的一起伴有Bax表达升高，阐明Bax高表达与肿瘤细胞凋亡密切相关，转染Bax到肿瘤细胞中能促进许多肿瘤细胞的凋亡。Bax与Bcl-2归于同源性蛋白，Bax可以经过过表达而按捺Bcl-2的效果，促进细胞凋亡。相反Bcl-2可以反抗凋亡，其可以增强DNA的反抗损害才能，按捺DNA损害分子传感器（p53），然后按捺凋亡。研讨标明[17-19]，Bcl-2在乳腺癌、结肠癌、肝癌中的表达状况，发现Bcl-2的水平增高，Bcl-2在神经母细胞瘤、鼻咽癌、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、胃癌等许多肿瘤中的表达也增强，提示Bcl-2在肿瘤细胞中的高表达可能按捺细胞凋亡而延伸细胞存活时刻。本次研讨中，子宫内膜癌安排中Bcl-2阳性表达水平最高，且与Smac呈负相关，且相关性较强，阐明Bcl-2可能是按捺Smac表达的要素之一。有研讨标明[20]，Survivin几乎在一切被检测过的肿瘤安排中，如胃癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌等均有不同程度的表达，阳性率为30%～100%，且Survivin的表达与多种肿瘤的生物学特性和（或）疾病分期有关。本研讨发现，Survivin在子宫内膜癌安排中也呈高表达，且与Bcl-2呈正相关，与Smac呈负相关，因而笔者估测，Survivin也可能是按捺Smac表达的一类因子。
综上所述，对疑似子宫内膜癌患者进行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表达的检测以进行进一步确诊，然后进步临床确诊率，为往后的临床医治计划供给新的医治靶点和思路。
[参考文献]
[1] 王海燕，丁燕. eIF-4E和PDGF在子宫内膜癌中的表达及临床含义[J]. 有用妇产科杂志，2014，30（4）：287-290.
[2] 侯箐岚. RECK、TFF2、ERβ在子宫内膜癌中的表达及 p16甲基化的临床含义[J]. 我国试验确诊学，2015，5（11）：1865-1869.
[3] 杨广东，任渊，张蓉，等. SERPINA3在子宫内膜癌中表达上调的临床含义及功用研讨[J]. 我国癌症杂志，2014，（4）：284-291.
[4] 赵敬，薛凤霞，华绍芳，等. 胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 中华妇产科杂志，2007，42（10）：696-700.
[5] 华绍芳，薛凤霞，赵敬，等. 磷脂酰肌醇3激酶通路在胰岛素调理子宫内膜癌细胞增殖凋亡中的效果[J]. 我国有用妇科与产科杂志，2007，23（11）：843-845.
[6] 范引侠，薛翔，主改侠，等. 凋亡调控因子Survivin和Caspase-3在子宫内膜癌中的表达及含义[J]. 西安交通大学学报（医学版），2007，28（1）：93-96.
[7] 吴玉新，王靖华，王华，等. Ki-67、前期凋亡相关蛋白M30在子宫内膜癌的表达及其与预后的联系[J]. 中华病理学杂志，2003，32（4）：314-318.
[8] 郭瑞霞，魏丽惠，赵丹，等. 雌激素受体拮抗剂ICI182780（Faslodex）对17β-雌二醇效果下子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 北京大学学报（医学版），2006，38（5）：470-474.
[9] 王利娟，杨玉琮，苟文丽，等. 青蒿琥酯按捺人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖及诱导其凋亡的机制[J]. 西安交通大学学报（医学版），2013，34（1）：93-97.
[10] 贾建军，王自能，刘革修，等. 肿瘤浸润性树突状细胞在子宫内膜癌中的凋亡及其Fas、Fasl表达含义[J]. 南边医科大学学报，2011，31（10）：1693-1696.
[11] 刘艳佳. 子宫内膜增生症的确诊发展[J]. 世界妇产科学杂志，2015，42（1）：38-41.
[12] 段华，邓小虹. 宫腔镜对子宫内膜癌确诊及癌细胞播散影响的研讨发展[J]. 有用妇产科杂志，2007，23（1）：17-19.
[13] 曹巍，金焰，傅松滨，等. DEAD box1基因与相关肿瘤的研讨发展[J]. 世界遗传学杂志，2011，34（2）：83-88.
[14] 朱红霞，刘爽，周翠琦，等. 抗凋亡基因survivin促进细胞转化的效果机制[J]. 中华医学杂志，2002，82（5）：338-340.
[15] Kunze D，Kraemer K. ，Erdmann K，et al. Simultaneous siRNA-mediated knockdown of antiapoptotic BCL2， Bcl-xL， XIAP and survivin in bladder cancer cells[J]. International Journal of Oncology，2012，41（4）：1271-1277.
[16] 杨连君，曹雪涛，于益芝，等. bcl-2，bax与肿瘤细胞凋亡[J]. 我国肿瘤生物医治杂志，2003，10（3）：232-234.
[17] 赵毅，邓鑫，王强，等. 凋亡相关基因Livin、Smac/DIABLO在胃癌安排中的表达及其含义[J]. 癌症，2009，28（6）：593-601.
[18] 刘陶文. 凋亡调控基因BCL2宗族研讨的新发展[J]. 生物化学与生物物理发展，1999，26（3）：216-218.
[19] 王梅，王冰，王晓丽，等. 凋亡相关基因survivin在子宫颈癌安排中的[J]. 中华妇产科杂志，2001，36（9）：546-548.
[20] 王卫东，陈正堂. Bcl-2/Bax 比率与细胞“命运”[J]. 我国肿瘤生物医治杂志，2007，14（4）：393-396.
（收稿日期：2016-04-21）
